نوع مقاله : علمی - پژوهشی
چکیده
هدف: با توجه به نقش ویتامین B12در تنظیم واکنشهای ایمنی در این مطالعه به عنوان یک عامل کمکی همراه با زهر زنبور عسل برای کاهش التهاب استفاده شد. این مطالعه برای بررسی اثر زهر زنبور عسل و ویتامین B12 روی التهاب و گلیوزیز در رتهای همراه با انسفالومیلیت آلرژیک انجام پذیرفت.
مواد و روشها: ترکیب هموژنه نخاع خوکچه هندی به همراه ادجوانت کامل فروند برای القاء انسفالومیلیت در رتهای لویس جهت ایجاد یک مدل از بیماری مالتی پل اسکلروزیز استفاده شد. بیماری در 40 رت القاء شد و آنها به طور تصادفی در 4 گروه قرار گرفتند و با زهر زنبورعسل و ویتامین B12 درمان شدند. درمان از روز بعد از القاء بیماری به وسیله GPSCH آغاز وبه مدت 10 روز طول کشید. روش ایمنو هیستوشیمی برای بررسی پروتئین اسیدی رشتهای گلیالی و از روش الایزا برای بررسی میزان تومور نکروزیز فاکتور- آلفا در سرم رتها استفاده شد.
نتایج : درمان با زهر زنبور عسل و ویتامین B12، نشانههای بد کلینیکی، سطح سرمی تومور نکروزیز فاکتور - آلفا و فرایند گلیوزیس در رتهای لویس القاء شده با ترکیب نخاع تازه خوکچه هندی را کاهش داد.
نتیجه گیری: ترکیب زهر زنبور عسل و ویتامین B12 به خاطر ممانعت از فعالیتهای سلولهای T خود واکنشگر، دارای خاصیت ضد التهابی بوده و آسیب به سیستم عصب مرکزی و گلیوزیز را کاهش میدهد.
کلیدواژهها
عنوان مقاله [English]
Effect of honey bee venom and vitamin B12 on gliosis of brain stem in rats with experimental allergic encephalomyelitis-animal model for multiple sclerosis
چکیده [English]
Aim: Regarding the role of vitamin B12 in regulating the immune reactions, this compouned is used in the present study as an accessory agent with the honey bee venom for reduction of inflammation. This study has been down for checking effects of bee venom and B12 on inflammation and gliosis in experimental allergic encephalomyelitis rats.
Material and Methods: The guinea pig spinal cord homogenate (GPSCH) along with the Complete Freund’s Adjuvant (CFA), was used for induction EAE in Lewis rats for creating a model of MS.EAE was induced in 40 rats, randomly divided to four groups and treated with honey bee venom and vitamin B12. The treatment started from the first day post immunization by GPSCH-CFA and continued for ten days. Immunohistochemical method used for study glial fibrillary acidic protein ( GFAP) and ELISA was used for assessment serum TNF-α.
Results:. Our data showed that treatment with the honey bee venom and vitamin B12 decreased the disorders of clinical scores, serum TNF-α and level gliosis in Lewis rats induced by GPSCH-CFA.
Conclusion: Combination of honey bee venom and B12 has anti-inflammatory activity by inhibiting generation of autoreactive T cells and decreases CNS and gliosis damages.
کلیدواژهها [English]
- Bee venom
- Experimental allergic encephalomyelitis
- Gliosis
- multiple sclerosis
- Vitamin B12
مقاله پژوهشی مجله علمی پژوهشی سلول و بافت
جلد 1، شماره 2، زمستان 1389، 45-37
تاثیر ترکیب زهر زنبور عسل و ویتامین B12 روی فرایند گلیوزیس در ساقه مغز رت های مبتلا به
انسفالومیلیت آلرژیک تجربی– مدل حیوانی مالتی پل اسکلروزیس
اکبر کریمی دانشجویPh.D.1*، کاظم پریور Ph.D.1، محمد نبیونی Ph.D.2،
سعید حقیقی Ph.D. 3، سهراب ایمانیPh.D.4
1- گروه زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم و تحقیقات تهران
2- گروه زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه تربیت معلم تهران
3- دانشکده داروسازی دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم دارویی
4- گروه سم شناسی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم و تحقیقات تهران
* پست الکترونیک نویسنده مسئول: Karimiakbar38@yahoo.com
تاریخ دریافت: 7/12/ 1389 تاریخ پذیرش: 21/1/1390
چکیده
هدف: با توجه به نقش ویتامین B12در تنظیم واکنشهای ایمنی در این مطالعه به عنوان یک عامل کمکی همراه با زهر زنبور عسل برای کاهش التهاب استفاده شد. این مطالعه برای بررسی اثر زهر زنبور عسل و ویتامین B12 روی التهاب و گلیوزیز در رتهای همراه با انسفالومیلیت آلرژیک انجام پذیرفت.
مواد و روشها: ترکیب هموژنه نخاع خوکچه هندی به همراه ادجوانت کامل فروند برای القاء انسفالومیلیت در رتهای لویس جهت ایجاد یک مدل از بیماری مالتی پل اسکلروزیز استفاده شد. بیماری در 40 رت القاء شد و آنها به طور تصادفی در 4 گروه قرار گرفتند و با زهر زنبورعسل و ویتامین B12 درمان شدند. درمان از روز بعد از القاء بیماری به وسیله GPSCH آغاز وبه مدت 10 روز طول کشید. روش ایمنو هیستوشیمی برای بررسی پروتئین اسیدی رشتهای گلیالی و از روش الایزا برای بررسی میزان تومور نکروزیز فاکتور- آلفا در سرم رتها استفاده شد.
نتایج : درمان با زهر زنبور عسل و ویتامین B12، نشانههای بد کلینیکی، سطح سرمی تومور نکروزیز فاکتور - آلفا و فرایند گلیوزیس در رتهای لویس القاء شده با ترکیب نخاع تازه خوکچه هندی را کاهش داد.
نتیجه گیری: ترکیب زهر زنبور عسل و ویتامین B12 به خاطر ممانعت از فعالیتهای سلولهای T خود واکنشگر، دارای خاصیت ضد التهابی بوده و آسیب به سیستم عصب مرکزی و گلیوزیز را کاهش میدهد.
کلمات کلیدی: زهر زنبور عسل، انسفالومیلیت آلرژیک تجربی، گلیوزیس، مالتی پل اسکلروزیس، ویتامین B12
مقدمه
مالتی پل اسکلروزیس (MS)یک بیماری التهابی مزمن میباشد که در آن ماده سفید سیستم عصبی مرکزی توسط سلولهای التهابی وT فعال شده مورد هدف قرار میگیرد و با نشانههائی شامل: التهاب، میلین زدایی و از بین رفتن اعمال نورولوژیک و افزایش فعالیت آستروسیت ها (گلیوزیس) مشخص میشود (1). انسفالومیلیت آلرژیک تجربی(EAE) بعنوان یک مدل حیوانی با ارزش برای بیماری MSدر نظر گرفته میشود و دانشمندان از آن جهت ارزیابی روند بیماری و فرایند درمانی استفاده میکنند (2). EAE در حیوانات توسط تزریق بافت سیستم عصب مرکزی و یا برخی از پروتئینهای ویژه میلین گونه جانوری دیگر مثل، Myelin Basic Protein (MBP) و یا oligodendrocyte Glycoprotein (MOG) Myelin همراه با ادجوانت ایجاد میشود. در EAE نشانههایی شامل فلج، التهاب، نواحی میلین زدایی شده در ماده سفید سیستم عصبی مرکزی، آسیب به سد خونی– مغزی، نفوذ سلولهای T (CD4+) و ماکروفاژها به سیستم عصبی مرکزی وگلیوزیس دیده میشود (3). میکروگلیاها و آستروسیتها نقش خود را در ایجاد بیماری با ترشح کردن ملکولهایی به عنوان واسطههای تخریب کننده بافتی انجام میدهند (4).
در بررسی بیماری MS و مدل حیوانی آن یعنی EAE بیومارکرهایی را در نظر میگیرند. یکی از این بیومارکرها پروتئین اسیدی رشتهای گلیالی(GFAP) میباشد که به عنوان مارکر آستروسیتها بوده و برای ارزیابی یکی از وقایع بیماری که همانا روند گلیوزیس میباشد استفاده میشود (5). آستروسیتها و میکروگلیاها در سیستم عصب مرکزی بعد از EAE و MS فعال شده و گلیوزیس بوجود میآید و فرایند التهاب در این زمینه نقش بسیار مهمی ایفا میکند(6).
زهر زنبور عسل (Apis melifera ) شامل انواع متفاوتی از پپتیدها با وزن ملکولی سبک و سنگین و پروتئینهایی شامل آپامین، آدولاپین، فسفو لیپاز A2 میباشد. بعلاوه اینکه شامل آمینهای فعال بیولوژی (هیستامین، اپی نفرین) و چندین نوع ترکیب غیر پپتیدی مشتمل بر لیپیدها، کربوهیدراتها و اسیدهای آمینه آزاد میباشد(7). ملیتین و فسفولیپاز A2 دو ترکیب عمده زهر زنبور عسل میباشند که عمدتا نقش مهمی در القاء و شروع واکنشهای آلرژیک مرتبط با نیش زنبور ایفا میکنند (8). زهر زنبور درمانی به طور گستردهای در درمان بیماریهای ضد التهابی مزمن موثر است(9). همچنین ویژگیهای ضد التهابی کل زهر زنبور عسل در مدل رت دارای آرتریت القاء شده، گزارش شده است و در آن دیده شده است که تزریق زهر زنبور عسل موجب سرکوب لوکوسیتها و کاهش غلظت تومور نکروزیز فاکتور-آلفا (TNF-a) میشود(7).
التهاب مزمن اغلب با استرسهای اکسیداتیو همراه بوده و زمینه ساز بسیاری از بیماریهای وابسته به سن شامل سرطان، آترواسکلروزیس، بیماریهای همراه با تخریب سیستم عصبی و آرتریت میباشد مشاهدات جدید پیشنهاد میکند که کوبالامینها (مشتقات ویتامین B12 ) ممکن است پاسخهای استرس اکسیداتیو را مدوله کند. بیماریهای التهابی با افزایش سطوح ترانس کوبالامینها همراه هستند. غلظت کوبالامینها سطوحTNF-a را در مایع مغزی نخاعی مدوله میکند. TNF-a در پاسخهای التهابی مهم میباشند و پیشنهاد شده که افزایش کوبالامین میتواند به عنوان مکمل در پاسخهای سلولی به التهاب، مورد استفاده قرار گیرد(10). فعالیتهای میلین زدایی و التهابی در بیماران MS با احیای مجدد میلین همراه است و به مصرف ویتامین B12 میانجامد(11).
از آنجایی که در طی EAE و ادامه روند التهاب، فعالیت آستروسیتها و نهایتا گلیوزیس افزایش پیدا میکند ما در این مطالعه از خاصیت ضد التهابی زهر زنبور عسل و ویتامین B12 استفاده کرده و اثرات آن را روی فعالیت آستروسیتها و روند گلیوزیس بررسی نمودیم تا ببینیم که این ترکیب درمانی تا چه اندازه میتواند جلوی یکی از مهمترین وقایع بیماری زایی EAE را بگیرد تا در آینده از آن به عنوان ترکیب درمانی جهت درمان MS استفاده شود.
مواد و روش ها
در این مطالعه تجربی جهت ایجاد مدل EAE ازروش Schnider وهمکارانش(12) استفاده شد. برای این منظور پس از تهیه ترکیب هموژنه نخاع خوکچه هندی (GPSCH) آن را به نسبت 1به 1 با ادجوانت کامل فروند (CFA) مخلوط کرده تا امولوسیونی از نخاع خوکچه هندی و ادجوانت کامل فروند (GPSCH-CFA) تهیه شد. با تزریق آن به رتهای لوئیس EAE در آنها القا گردید.
رتهای لوئیس استفاده شده خالص بوده و در مرکز تکثیر و پرورش حیوانات آزمایشگاهی شرکت کارخانجات دارو پخش تهران نگهداری میشدند. حیوانات دسترسی آزادانه به آب و غذا داشته و کلیه شرایط نگهداری آنها استاندارد و مطابق با کتاب راهنمای نگهداری و مراقبت و استفاده از حیوانات آزمایشگاهی انتشار یافته توسط (National Academy Press Washington , D.C , 1996 ) بود.
دارو درمانی: EAE در 40 رت القاء شد و سپس به صورت تصادفی در 4 گروه 10 تایی به شرح ذیل تقسیم شدند:
گروه 1: تحت عنوان گروه E-S نامگذاری شدند و روزانه نرمال سالین را به صورت داخل صفاقی دریافت میکردند.
گروه 2: تحت عنوان E-B12 نامگذاری شدند و یک روز در میان ویتامین B12 را به میزان mg/kg 15دریافت میکردند(13) .
گروه 3: تحت عنوان E-BV نام گرفتند و روزانه زهر زنبور عسل را به میزان mg/kg 2 از طریق داخل صفاق دریافت میکردند (14).
گروه 4: با نام E-BB بودند که هر روز زهر زنبور عسل را به میزان mg/kg2و ویتامین B12 را یک روز در میان به میزان mg / kg 15 از طریق داخل صفاقی دریافت میکردند.
درمانها از روز اول بعد از تزریق GPSH –CFA آغاز شد و تا روز دهم به طول انجامید.
ارزیابیهای کلینیکی EAE: روز تزریق ترکیب GPSH –CFA به عنوان روز صفر بعد از تزریق (0dpi) در نظر گرفته شد. رتها به طور روزانه جهت بررسی علائم و نشانههای کلینیکی و تغییرات وزن بدن مورد ارزیابی قرار گرفتند. ارزیابیها تا 19dpi به طول انجامید و در هر روز بر اساس درجهبندی ذیل امتیاز بندی شدند:
صفر: نرمال و بدون نشانههای کلینیکی، یک: دم فاقد کشیدگی طبیعی باشد، دو: فلج دم، سه: فلج جزئی در اندام حرکتی عقبی، چهار: فلج کامل در اندام حرکتی عقبی، پنج: فلج کامل اندام حرکتی عقبی و فلج جزئی در اندام حرکتی فوقانی، شش: مرگ و میر.
اندازه گیری پارامترهای سرمی: درروز (dpi14) نمونه خون از آنها گرفته شد. سپس سرم آنها را جدا کرده و میزان TNF-α در سرم رتها از طریق روش الایزا و با استفاده ازکیت مخصوص تعیین TNF-aدر سرم رت ساخت شرکت (Abcam) اندازه گیری شد.
بررسیهای ایمنو هیستوشیمیایی برای ارزیابی فعالیت آستروسیتها: در dpi19 پس از بیهوش کردن رتها مغز آنها خارج کرده و به دقت ساقه مغز جدا شد و سپس به مدت 24 ساعت در محلول فیکساتیو نگهداری شدند. با استفاده از میکرتوم برشهای 5 میکرومتری از بافت تهیه شد و فرایندهای پارافین زدایی و به آبدهی در مورد آنها اجرا شد. برای باز آرایی آنتی ژنی، برشها داخل بافر Tris-EDTA قرار داده و به مایکروویو 850 W منتقل شدند. سپس برشها با آب سرد جاری شستشو داده و در ادامه با محلول TBS شستشو شدند. برای متوقف کردن فعالیت Endogenous peroxidase از محلول بلاکر شامل H2O2 1 درصد در متانل استفاده شد. در ادامه برشها به مدت 2 ساعت در دمای 4 درجه سانتیگراد با Rabbit anti –Rat GFAP ساخت شرکت (Abcam) به عنوان آنتی بادی اولیه، انکوبه شدند. سپس لام ا با TBSشستشو و سپس با HRP anti-rabbits IgG (Abcam) به مدت 30 دقیقه در دمای 37 درجه سانتیگراد انکوبه شدند. برای pvisualization از تکنیک استانداردDiaminobenzidine (DAB) استفاده شد. برای نمونههای کنترل هم تمامی روش فوق بدون کاربرد آنتی بادی اولیه اجرا شد. از هرگروه 5 برش به طور تصادفی انتخاب و تعداد سلولهای GFAP مثبت در هر برش به صورت تصادفی در زمینههایی با بزرگ نمایی بالا (×400) توسط فردی که اطلاعی از گروهای درمانی نداشت، مورد شمارش قرار گرفت(15).
روشهای آماری: تمام تستها با استفاده از نرم افزار SPSS و با روش Mann Whitney U-test به لحاظ آماری مورد بررسی قرار گرفت. P
نتایج
تاثیر ترکیب زهر زنبور عسل و ویتامین B12 روی تحرک و شرایط کلینیکی رتهای EAE:
بعد از تزریق امولوسیون GPSCH-CFA به رتها، برخی از آنها در گروههای مختلف، از 9dpiنشانههایی مثل کاهش فعالیتهای جستجویی، کاهش رفتارهای تغذیهای و کاهش وزن بدن را بروز دادند. در روز 11dpi علائمی همانند از دست دادن کشیدگی دم، فلج جزئی در ناحیه دم در گروههای E-S و E-B12 دیده شد و این در حالی بود که این نشانهها در گروهE-BV از 12dpi و در گروه E-BB از روز 13dpi مشاهده شد. نشانههای یاد شده به تدریج بیشتر و بیشتر شده و در نهایت به بروز فلج کامل در اندام تحتانی منجر گردید. این نشانهها در گروه E-S باشدت بیشتر دیده شد. (نمودار1).
با توجه به این نمودار دیده میشود که میانگین شدت بیماری در گروههای تحت درمان نسبت به گروه E-S کاهش پیدا کرده است. میانگین شدت بیماری در گروههای E-BB و E-BV نسبت به گروه E-S به صورت معنیداری کاهش یافته بود(p<0.05). نتایج نشان میدهند که ترکیب زهر زنبور عسل و ویتامین B12 به صورت معنیداری میتوانند نشانههای سخت کلینیکی را در رتهای EAE کاهش دهند.
تاثیر ترکیب درمانی روی سطح سرمی TNF-a:
میزان TNF-a در سرم رتها در گروههای مختلف با روش الیزا اندازه گیری شد. نتایج آن به صورت خلاصه در شکل (1) نشان داده شده است. میزان TNF-aدر گروههایی که تحت درمان قرار گرفته بودند نسبت به گروه E-S کاهش پیدا کرده بود و این روند کاهشی در گروههای E-BBو E-BV به صورت معنیداری (p<0.05) مشهود بود.
این نتایج نشان میدهد که ترکیب زهر زنبور عسل و ویتامین B12 توانسته است به صورت معنیداری(p<0.05) میزان TNF-a را در سرم رتهایEAE کاهش دهد.
تاثیر ترکیب زهر زنبور عسل و ویتامین B12 روی فعالیت آستروسیتها:
تاثیر ترکیب درمانی روی فعالیت آستروسیتها با روش ایمینو هیستوشیمی روی برشهای بافت مغزی با هدف قرار دادن مارکر GFAP (بعنوان شاخص عملکرد آستروسیتها) انجام گرفت. سلولهای GFAP مثبت و تفاوت در تعداد آنها در گروههای مختلف در شکل(2) نشان داده شده است. نتایج حاصل از شمارش سلولهای GFAP مثبت در برشهای ساقه مغزی به صورت خلاصه در شکل (3) آمده است. تعداد سلولهای GFAP مثبت در گروه E-S به صورت قابل توجهی افزایش یافته بود. کاهش تعداد سلولهای GFAP مثبت در گروه E-BB نسبت به گروه E-S در ناحیه ساقه مغزی به صورت معنیداری کاهش یافته بود (p<0.05) این روند کاهشی در گروه E-B12 دیده شد ولی معنیدار نبود.
نتایج نشان میدهد که ترکیب درمانی زهر زنبور عسل و ویتامین B12 موجب کاهش تعداد سلولهای GFAP و در نهایت موجب کاهش فعالیت آستروسیتها وگلیوزیس در رتهای EAE میشود.
نمودار1: نمودار تغییرات شدت بیماری در روزهای مختلف بعد از واکسینه کردن با نخاع خوکچه هندی در گروههای تحت درمان. همانطور که در شکل دیده می شود در گروهی که هر دوی زهر زنبور و ویتامین B12 را دریافت کرده اند شدت علائم کلینیکی یافته است، هرچند که این کاهش علائم کلینیکی در سایر گروههای تحت درمان هم دیده می شود ولی روند آن در گروه E-BB معنی دار تر ((p< 0.05 است.
شکل 1: سطوح TNF- در سرم رت ها در گروههای مختلف بیشترین مقدار TNF-α و نیترات در سرم مربوط به گروه E-S وکمترین آنها مربوط به گروه E-BB می باشدP<0.05)*(. کاهش سطوح یاد شده در مقایسه با گروه E-S را نشان می دهد.
شکل 2: سلولهایGFAP مثبت در ساقه مغز در گروههای مختلف
برشهایی از ساقه مغز که با روش ایمنوهیستوشیمی با هدف تعیین آستروسیت ها و مارکر GFAP رنگ آمیزی شده است
A-گروه E-S (گروهی که مبتلا به EAE بوده وفقط نرمال سالین به عنوان درمان دریافت می کردند) روند گلیوزیس در این گروه از سایرین بیشتر است. B- گروه E-B12 (گروهی که مبتلا به EAE بوده و ویتامین B12 رادریافت کرده اند). C- گروه E-BV (گروهی که مبتلا به EAE بوده و زهر زنبور رادریافت کرده اند). D- گروه E-BB (گروهی که مبتلا به EAE بوده و زهر زنبور و ویتامین B12را دریافت کرده اند.
شکل 3: تعداد سلولهای GFAP مثبت در ساقه مغز رتها در گروههای مختلف نحوه شما رش سلولهای GFAP مثبت درقسمت مواد و روشها آمده استP<0.05)*.( کاهش سلولهای GFAP مثبت را در مقایسه با گروه E-S نشان میدهد.
بحث
کاربرد پزشکی محصولات زنبور عسل از زمانهای قدیم مورد استفاده قرار گرفته است و امروزه زهر زنبور عسل به طور گستردهای در درمان آرتریت و دیگر بیماریهای التهابی، خود ایمنی و تخریب کننده مورد استفاده قرار میگیرد (16) . زهر زنبور عسل اثرات ضد التهابی و ضد دردی روی واکنشهای التهابی دارد. زهر زنبور عسل شامل انواعی از پپتیدها، آنزیمها و آمینهای فعال و ترکیبات دیگر است که به عنوان عوامل کمکی در بهبودی MS میتواند موثر باشد. برای مثال ملیتین سوبسترای اصلی زهر زنبور عسل، یکی از قویترین عوامل شناخته شده ضد التهابی میباشد و همچنین آدولاپین یک سوبسترای ضد التهابی قوی دیگر است که فعالیت سیکلو اکسیژنازی را مهار میکند (14) .گزارش شده است که زهر زنبور عسل از تولید اینترلوکین 1ß (IL-1ß) و TNF-α از ماکروفاژها در رتها در پاسخ به تحریک داخلی با لیپو پلی ساکارید باکتریایی ممانعت بعمل میآورد (17). ترکیبات آلرژیکی اولیه زهر زنبور عسل مثل هیستامین و فسفولیپاز A2 ، تولید اینترلوکین -10( IL-10 ) را به وسیله سلولهای Th2 القاء کرده و تکثیر سلولهای Tرا سرکوب میکند و میتواند در کاهش التهاب و نهایتا کاهش میلین زدایی نقش داشته باشد(18). با توجه به مطالعات انجام گرفته درمورد تاثیرات زهر زنبور عسل روی بیماریهای التهابی و خود ایمنی و خواص و ترکیبات ضد التهابی و تعدیل کنندگی ایمنی آنها، انتظار آن میرفت که در مطالعه خود این اثرات را مشاهده نماییم. با توجه به نتایج بدست آمده در زمینههای علائم کلینیکی، سطح سرمی TNF-a، انتظارات ما برآورده شد و مشاهده نمودیم که ترکیب زهر زنبور عسل و ویتامین B12، این علائم را کاهش داده است(7و14). علاوه بر تأثیرات ضد التهابی واکنش اکسیدانی زهر زنبور عسل که در مطالعات مختلف دیده شده و در بالا نیز به آنها اشاره شده است میتوان از نقش کمکی ویتامین B12 هم یاد کرد خواص آنتی اکسیدانی و ضد التهابی ویتامین B12، احتمالاً نتیجهای از یک ترکیب اثرات مستقیم و غیر مستقیم است این تأثیرات شامل تحریک فعالیت میتونین سنتتاز، واکنش مستقیم با اکسیژن reactive، گونههای نیتروژن، تأثیر در ذخیره جزئی گلوتاتیون و تعدیل کردن ملکولهای پیام رسان میباشد. میتوان گفت که کوبالامینها دارای فعالیتهای آنتی اکسیدانی شاخص در جایگاههای فارماکولوژی بوده و موجب حفاظتهای سلولی مهم علیه استرسهای اکسیداتیو و التهاب میشوند(10). TNF-α و اینترفرون گاما از جمله سیتوکینهای پس التهابی هستند که عمدتا به توسط سلولهای T خود ایمنی ترشح شده و مستقیما سد خونی– مغزی را تخریب کرده و آپوپتوزیس اولیگودندروسیتها را القاء میکند و عاملی در جهت میلین زدایی محسوب میشود(19). در رتهای مدل EAE سطح سرمی TNF-α در شروع بیماری، تنظیم افزایشی پیدا نمود، که بیانگر آن است که TNF-α نقش مهمی در شروع وگسترش بیماری دارد (12). با توجه به نقش TNF-α در گسترش بیماری و حالات EAE و هدف درمانی آن، در این مطالعه نیز به اندازه گیری آن در سرم رتهای مدل EAE واقع در گروههای مختلف پرداخته شد و که مشاهده شد که میزان آن در گروهی که درمانی را دریافت نکرده بودند افزایش یافت. این نتایج Shnider و همکارانش (12) و Pollak و همکارانش (20) مطابقت دارد. سطوح پلاسمایی TNF-α با شدت و سختی EAE و بیماری MS ارتباط داشته و بیانگر حالات ایمنی است.
در مطالعه حاضر سطح سرمی TNF-aدر گروهی که هر دو ترکیب زهر زنبور عسل و ویتامین B12 را در یافت کرده بودند کاهش یافت که موافق با نتایج کار Nam و همکارانش(21) میباشد. این تحقیق اعلام نمود که زهر زنبور عسل میتواند از تولید سیتوکینهای پس التهابی مانند TNF-α ممانعت بعمل آورد. مطالعات از اهمیت اثرات ایمنی ویتامین B12 حمایت میکند این اثرات شامل مدوله کردن فعالیت سیتو کین TNF-α میباشد(11) .
ما در مطالعه خود مشاهده نمودیم که رتهای مبتلا به EAE دارای افزایش میزان GFAP در ساقه مغز خود بودند و این نتایج موافق با مطالعه Nylen و همکارانش(22) اشد، چرا که افزایش بیان GFAP ممکن است در ارتباط با صدمه مغزی و گلیوزیس باشد و GFAP مارکری است که با وسعت آسیب مغزی مرتبط است.
GFAP عضوی از خانواده اسکلت سلولی محسوب میشود و در فرایندهای حرکتی آستروسیتی و شکلی آن، با ایجاد ساختارهای تثبیتی شرکت میکند. در سیستم اعصاب مرکزی مهره داران عالی در پی جراحت و صدمات ناشی از تروما، بیماریها، اختلالات ژنتیکی و تاثیرات شیمیایی، آستروسیت ها باز فعال شده و حالت آستروگلیوزیس را بوجود میآورند. در آستروگلیوزیس سنتز سریع GFAP را شاهد هستیم (23).
مطالعه حاضر نشان داد که ترکیب زهر زنبور عسل و ویتامین B12 منجر به کاهش بیان GFAP (به عنوان مارکر آستروسیتها) شده است که این نتایج درمانی با نتایج کار Wang و همکارانش (15) مخالف است. وی در بررسی خود اعلام کرده بود که ماده Idazoxan باعث کاهش GFAP در رتهای مبتلا به EAE میشود این پدیده را میتوان این گونه توجیه کرد که اعمال بیولوژیکی آستروسیتها هم در فرایندهای محافظتی و هم در فرایندهای تخریبی میتواند نمود داشته باشد.
نقش GFAP در توسعه حالات EAEو درمان آن پیچیده است به خاطر آنکه آستروسیتها در فعالیتهای چند گانهای شامل تنظیم جریان گلوتامات، فعالیت سیکلو اکسیژناز -2 (COX-2 ) و فعالیت سنتز و تولید نیتریک اکساید ( NO ) و همینطور تولید سیتوکینهای ضد التهابی و پس التهابی و فاکتورهای ترو فیک دخالت دارد(15). در موشهایی که فاقد بیان GFAPهستند گزارش شده است که بیشتر مستعد گسترش بیماری EAE هستند و با علائم شامل نفوذ بیشتر سلولهای التهابی به سیستم عصب مرکزی مشخص میشوند(24). نتایج حاصل از کار ما با نتایج حاصل از کار Mastronardi و همکارانش (13) موافق است. وی در مطالعهاش نشان داد که ترکیب اینتر فرون بتا و ویتامین B12 منجر به کاهش بیانGFAP در مدلهای EAE میشود. یک مکانیزم ممکن برای این قضیه شاید متیلاسیون نواحی پروموتر ژنها باشد که به سبب آن اثر شان غیر فعال میشود. برای مثال ژن GFAPتوسط متیلاسیون کاستهای CPG در پروموترهایش تنظیم شده است.
نتیجه گیری
ترکیب زهر زنبور عسل و ویتامیین B12 باعث کاهش شرایط سخت کلینیکی، سطح سرمی TNF-a و گلیوزیس در رتهای مبتلا به EAE میشود و این تاثیرات در راستای خواص ضد التهابی زهر زنبور عسل و در کنار آن ویتامین B12 میباشد که با تعدیل کردن سیستم ایمنی وجلوگیری از تکثیر سلولهای T خود واکنشگر باعث تخریب کمتر بافت سیستم عصب مرکزی شده و در نهایت فرآیند گلیوزیس که یکی از مهمترین نتایج تخریب است، با شدت کمتری بروز میکند.
تشکر و قدردانی
از مدیر عامل محترم شرکت کارخانجات دارو پخش، جناب آقای دکتر ناصر نقدی و جناب آقای دکتر سعید حقیقی معاونت محترم کنترل کیفیت به دلیل فراهم نمودن شرایط کار و همکاری با انجام این مطالعه در شرکت کارخانجات داروپخش صمیمانه قدردانی میشود.