دانشگاه اراک سلول و بافت 2228-7035 14 3 2023 09 23 Activation of Calcitonin Receptor in HEK-293T Cells Increases the Expression of -Catenin-target Genes فعالیت گیرنده کلسیتونین (Calcitonin receptor) در سلول‫های HEK-293T باعث افزایش بیان ژن‫های هدف پروتئین -Catenin می‫شود 166 179 709055 10.61186/JCT.14.3.166 FA حدیثه آزادمنش گروه علوم سلولی و مولکولی- دانشکده زیست شناسی- دانشکدگان علوم- دانشگاه تهران صندوق پستی 6455-14155 تهران- ایران. 0009-0001-9593-6869 سید محمود عرب نجفی گروه علوم سلولی و مولکولی- دانشکده زیست شناسی- دانشکدگان علوم- دانشگاه تهران صندوق پستی 6455-14155 تهران- ایران. Journal Article 2023 11 27 Aim: b-Catenin is a known proto-oncoprotein which its upregulation is involved in tumorigenesis of several human cancers including colorectal cancer, melanoma, pancreatic, ovarian and many other human malignancies. It is believed that this protein is a very potential target for cancer prevention and therapy. Although b-Catenin was originally identified as a component of the canonical Wnt signaling, there are many reports that this protein can also be regulated by several other signaling pathways including those through receptor tyrosine kinases, PI3-kinses and heterotrimeric G-proteins. It is quite likely that regulation of b-Catenin by multiple signaling pathways is a result of the cross-talk among these pathways. We and others have already provided evidence that activation of almost all members of the Ga subunits of heteritrimeric G-proteins can regulate b-Catenin via different mechanisms. For example, by using several cell systems, we have shown that activation of the Gaq class of Ga proteins leads to inhibition of GSK-3b and cellular accumulation of b-Catenin, suggesting that Gaq signaling may somehow positively regulate the canonical Wnt signaling. We have also confirmed the positive role of Gaq on b-Catenin-mediated signaling by using a couple of specific Gaq blocking peptides. Receptors for G-proteins (G protein-coupled receptors, GPCRs) are the most diverse family of proteins in mammals which are involved in many critical cellular processes. Around one thousand different GPCRs are encoded by human genome and more than 30% of the approved therapeutic drugs, target these receptors. Calcitonin receptor (CTR) is a member of the GPCR family (B1 subfamily) which is shown to couple to Gaq or Gas containing trimeric G proteins involved in primarily activation of phospholipase Cb1 and adenylate cyclase respectively. The known ligand for Calcitonin receptor is a 32 amino acid peptide called Calcitonin which is produced by several tissues in the body including thyroid, prostate, and central nervous system. CTR-mediated signaling has very important biological roles in many tissues including bones in which this signaling pathway is involved in maturation of osteoclasts and bone homeostasis. Calcitonin receptor is a GPCR family member which functions through activation of Gs and Gq trimeric G proteins and therefore, in this study we have examined whether activation of this receptor has any effect on b-Catenin transcriptional activity by measuring the expression of several b-Catenin-target genes including a reporter luciferase gene harboring several b-Catenin/T-cell factor recognition elements. Material and Methods: HEK293T cell culture and transfection with appropriate genetic constructs plus gene expression assays at the level of transcription including quantitative RT-PCR and real-time PCR have been used in this study. Results: The results showed that cellular activation of Calcitonin receptor increases the expression of several b-Catenin-responsive genes. Expression of the reporter luciferase, CCND1 (the Cyclin D1 encoding gene), c-MYC, and FGF-20 (Fibroblast growth factor-20) was increased upon the expression of Calcitonin receptor in HEK293T cells or treatment of these cells with Calcitonin. Conclusion: The Calcitonin receptor-mediated signaling may activate b-Catenin and (or) the Wnt/b-Catenin pathway. Further investigations are required to find out the exact mechanism of regulation of the Wnt/b-Catenin pathway by Calcitonin receptor-mediated signaling. Since b-Catenin is a potential oncogene in human cancers, Calcitonin receptor and its signaling partners can be considered for clinical studies. هدف: پروتئین b-Catenin در سلول‫های حیوانی حداقل دارای دو عمل ویژه است. این پروتئین از یک طرف نقش مهمی در تشکیل و پایداری اتصالات سلول به سلول خصوصا در بافت‫های پوششی (اپی‫تلیال) دارد و از طرف دیگر به‫عنوان عضوی از مسیر پیام رسانی متعارف Wnt در کنترل بیان عده ای از ژن‫های مهم سلولی عمل می‫کند. مسیرهای پیام رسانی از طریق پروتئین‫های G سه زیرواحدی (trimeric G proteins) در تنظیم فعالیت پروتئین b-Catenin نقش مهمی دارند. گیرنده هورمون کلسیتونین (calcitonin receptor) یکی از این گیرنده‫ها است و در این پژوهش اثر بیان و فعالیت این گیرنده بر عملکرد ژنتیکی پروتئین b-Catenin مورد مطالعه قرار گرفته است. مواد و روش‫ها: در این مطالعه از آزمایشات کشت سلو‫ل‫های HEK-293T و ترنسفکشن آنها با روش فسفات کلسیم استفاده شد. اندازه گیری بیان ژنتیکی در سطح رونویسی توسط روش های Reverse Transcriptase-PCR کمی و real-time PCR انجام گردید. از ژن لوسیفراز تحت کنترل نواحی قابل شناسایی پروتئین b-Catenin به‫عنوان ژن گزارش‫گر و ژن های c-MYC، FGF20 و CCND1 به عنوان ژن‫های سلولی مورد هدف پروتئین b-Catenin استفاده شد. نتایج: نتایج این مطالعه نشان دادند که بیان گیرنده کلسیتونین در سلو‫ل‫های HEK-293T و نیز در معرض قرار دادن این سلو‫ل‫ها با هورمون کلسیتونین باعث افزایش بیان ژن گزارشگر لوسیفراز و نیز ژن های انتخابی بومی سلول که تحت کنترل پروتئین b-Catenin هستند می‫شود. نتیجه گیری: با توجه به نقش انکوژنیک b-Catenin در بسیاری از سرطان‫های انسانی می‫توان گیرنده کلسیتونین و مسیر پیام‫رسانی وابسته به آن را در مطالعات کلینیکی در نظر داشت.

دانشگاه اراک سلول و بافت 2228-7035 14 3 2023 09 23 Overexpression of Alfalfa Glutamate Semialdehyde Aminotransferase Gene in Tobacco and Analysis of its Physiological Results فوق‌بیان ژن گلوتامات سمی‌آلدهیدآمینوترانسفراز گیاه یونجه در گیاه تنباکو و تحلیل نتایج فیزیولوژیک آن 180 202 710000 10.61186/JCT.14.1.180 FA مریم قاسم زاده دانشگاه لرستان، دانشکده علوم پایه، گروه زیست شناسی 0000-0003-2808-3728 حمزه امیری استاد، دانشگاه لرستان، دانشکده علوم پایه، گروه زیست شناسی مهدی خزاعی دانشیار، دانشگاه اصفهان، دانشکده علوم پایه، گروه زیست شناسی 0000-0003-2204-3362 احمد اسماعیلی استاد، دانشگاه لرستان، دانشکده کشاورزی، گروه بیوتکنولوژی Journal Article 2024 01 13 Aim: The chlorophyll biosynthesis pathway is a main target for genetic modification to change plant photosynthesis and growth rate to support a greater demand for food in the growing world population. In this study, the effect of overexpression of GSA gene one of gene involved in biosynthesis pathway of chlorophyll on physiological condition of tobacco plant was investigated. 5-Aminolevulinate (ALA) is product of GSA gene. ALA is a precursor for all tetrapyrrole, these components have impotent roles in living cell, as pigments, light receptor (Phytochrome), prosthetic group of many different proteins (like cytochromes, hemoglobin, myoglobin, and leghemoglobin) and enzymes (for example Catalase, Ascorbate, Peroxidase and etc.). Nowadays, ALA has received wide attention for its widespread usage in agriculture, forestry and medication. ALA at low concentrations increases photosynthesis, growth, development, yield and productivity, also promoted fruit color appearance and quality and taste of products in treated plants under both normal and stressful conditions. ALA also improves antioxidant features, absorption of nutrient, water use efficiency and osmotic balance in plants. Materials and methods: In this research, according to bioinformatics studies, MsGSA gene cDNA of Alfalfa (Medicago sativa L. cv. Isfahani) was selected to transfer to Xanthi tobacco (Nicotiana tabacum) plant, the binary expression vector pBI121 which has Kanamycin antibiotic resistance gene for selection in bacteria and plants, cutting sites for SacI and BamHI enzyme, CaMV35S promoter (cauliflower mosaic virus promoter), nos transcription termination sequences and ß-glucuronidase (GUS) reporter gene was used. After constructing the gene construct pBI121-GSA and confirming the transfer of the construct using PCR cloning methods, enzymatic digestion and sequencing were performed, then the corresponding construct was transferred to Agrobacterium tumefaciens strain LB4404 using Agrobacterium with the gene construct. The corresponding gene was transferred to the tobacco plant genome and the transgenic plants were selected on the medium containing kanamycin and the presence of the gene was confirmed by performing PCR in the regenerated plants. The rooted transgenic sprouts were transferred to the soil. The level of GSA gene expression in the resulting transgenic plants was evaluated by real-time PCR, and their growth rate and biochemical content were also evaluated. Results: It was observed that the growth of transgenic plants increased significantly depending on the level of GSA gene expression, and the content of ALA (aminolevulinic acid) and chlorophyll a, b and total chlorophyll, which are the products of the corresponding gene expression. The results also showed the content of anthocyanin, flavonoids and phenol of plants have significantly increased in proportion to the increase in GSA gene expression compared to wild type tobacco plants. Conclusion: The growth rate as well as the content of chlorophyll a, b, total chlorophyll, ALA, anthocyanin, flavonoids and phenol of transgenic GSA plants is proportional to the increase in the expression of the GSA gene. The results from this study indicate that an increase in transgenic growth rate as well as an increase in the secondary metabolites content in transgenic plants were influenced by GSA transferred gene and an increase in the content of ALA. These results imply that transgenic tobacco plants expressing MsGSA gene had higher resistance potential to stresses than the wild type tobacco plants. هدف: مسیر بیوسنتز کلروفیل یکی از اهداف مهم ایجاد تغییرات ژنتیکی به‫منظور تغییر سرعت فتوسنتز و رشد گیاهان برای تامین افزایش تقاضای غذا در جمعیت رو به رشد جهان است. در این مطالعه تاثیر فوق بیان ژن GSA یکی از ژن‌های مسیر بیوسنتز کلروفیل بر شرایط فیزیولوژیکی گیاه تنباکو مورد بررسی قرار گرفت. 5-آمینولوولینیک اسید (ALA) محصول ژن GSA است. ALA پیش‌ساز ساخت تتراپیرول‌ها است. این ترکیب نقش بسیار مهمی در سلول‌های زنده دارد مثلا به‫عنوان رنگدانه‌ها، گیرنده نور (فیتوکروم)، گروه پروستاتیک بسیاری از پروتئین‌ها (مثل سیتوکروم‌ها، هموگلوبین، میوگلوبین و لگ هموگلوبین) و آنزیم‌ها (مثل کاتالاز، آسکوربات، پراکسیداز و غیره) نقش دارند. امروزه ALA به‫دلیل استفاده گسترده از آن در کشاورزی، جنگلداری و داروسازی مورد توجه زیادی قرار گرفته است. ALA در غلظت‌های پایین فتوسنتز، رشد و نمو، عملکرد و بهره‌وری را افزایش می‌دهد. همچنین ظاهر، رنگ میوه ، کیفیت و طعم محصولات را در گیاهان تیمار شده در شرایط عادی و استرس‌زا افزایش می‌دهد. ALA همچنین ویژگی‌های آنتی اکسیدانی، جذب مواد مغذی، راندمان مصرف آب و تعادل اسمزی را در گیاهان بهبود می‌بخشد. مواد و روش‌‌ها: در این تحقیق با توجه به مطالعات بیوانفورماتیکی cDNA ژن MsGSA گیاه یونجه رقم اصفهانی برای انتقال به گیاه تنباکو رقم Xanthi انتخاب گردید. از ناقل بیانی دوگانه گیاهی ‏pBI121‎‏ که دارای ژن مقاومت آنتی‌بیوتیک کانامایسین برای انتخاب در باکتری‌ها و گیاهان، محل‌های برش برای آنزیم‌های SacI و BamHI، پروموتر CaMV35S (پرموتور ویروس موزاییک گل کلم)، توالی خاتمه دهندهی نسخه‌برداری nos و ژن گزارشگر β-گلوکورونیداز (GUS) استفاده شد. پس از ساخت سازه ژنی pBI121-GSA و تایید انتقال سازه با استفاده از سه روش کلون PCR، هضم آنزیمی و ترادف‌یابی سازه مربوطه به اگروباکتریوم تومفسینس سویه LB4404انتقال داده شد. با استفاده از اگروباکتریوم واجد سازه ژنی، ژن مربوطه به ژنوم گیاه تنباکو منتقل و گیاهان تراریخته روی محیط گزینشی انتخاب شدند و وجود ژن با انجام PCR در گیاهان باززایی شده تایید شد. جوانه‌های تراریخته ریشه‌دار شده به خاک منتقل شدند. میزان بیان ژن GSA در گیاهان تراریخته حاصل با RT-PCR مورد ارزیابی قرار گرفت و میزان رشد و محتوای بیوشیمیایی آن‌ها مورد بررسی قرار گرفت. نتایج: نتایج نشان داد که رشد گیاهان تراریخته به‫صورت معنی‌داری بسته به میزان بیان ژن GSA افزایش یافت همچنین محتوای ALA (آمینولوولینیک اسید)، کلروفیل a، b و کلروفیل کل که محصول بیان ژن مربوطه می‌باشد. همچنین نتایج نشان می‌دهد که محتوای آنتوسیانین‌ها، فلاونوئیدها و ترکیبات فنل گیاهان تراریخته متناسب با میزان افزایش بیان ژن GSA به‫طور معنی‌داری نسبت به گیاهان تیپ وحشی افزایش پیدا کرده است. نتیجه‌گیری: افزایش میزان رشد، محتوای کلروفیل a،b ، کلروفیل کل، ALA، آنتوسیانین، فلاونوئیدها و فنل گیاهان تراریخته متناسب با میزان افزایش بیان ژن GSA است و این بیانگر افزایش توان رشدی و افزایش پتانسیل مقاومت در گیاهان تراریخته تحت تاثیر ژن انتقالی GSA و افزایش محتوایALA است

https://jct.araku.ac.ir/article_710000_0094e59bc4f37e76fe5d90b11a7e817b.pdf

دانشگاه اراک سلول و بافت 2228-7035 14 3 2023 09 23 In Vitro Callus Formation And Regeneration Of Juniperus seravschanica Kom. In Different Culture Media مطالعه کالوس‌زایی و باززایی اُرس یا سرو کوهی (Juniperus seravschanica) در محیط کشت‌های مختلف در شرایط در شیشه (in vitro) 203 216 710002 10.61186/JCT.14.3.203 FA فرزانه فرزان دانشجوی کارشناسی ارشد بخش زیست‌شناسی، دانشگاه شهید باهنر کرمانf فرخنده رضانژاد استاد بخش زیست‌شناسی، دانشگاه شهید باهنر کرمان الهه زمانی دانش‌آموخته دکتری، بخش زیست‌شناسی، دانشگاه شهید باهنر کرمان Journal Article 2024 01 13 Conclusion: It seems that various factors such as genotype, polyploidy or hybrid formation, slow plant growth (which is common in coniferal), or secondary compounds are the reasons for the low rate of regeneration, especially rooting. Also, the duration of cultivation can be effective in rooting. هدف: اُرس (Juniperus. L) یکی از پیچیده‌ترین جنس‌های مخروطیان است که پس از کاج‌ها، با حدود 75 گونه رایج‌ترین درختچه‌ها و درختان همیشه سبز را تشکیل می‌دهد. مطالعات متعددی به اهمیت این جنس در تثبیت خاک، استفاده زینتی، دارویی و صنعتی آن اشاره کرده‌اند. ارس یا سرو کوهی (Juniperus seravschanica)، در استان کرمان پراکنش وسیعی دارد، بهرحال، در اغلب مناطق دانه‌رست‌ها یا گیاهان جوان، به مقدار خیلی کم مشاهده می‌شوند که اشاره به رویش سخت دانه‌ها به دلایل مختلف دارد. همچنین ریشه‌دهی سخت آن‫ها در شرایط کشت در شیشه گزارش شده است. بنابراین، برای غلبه بر این مشکلات، نیاز به یافتن یک روش بهینه، برای تشکیل و تکثیر ساقه و تحریک ریشه‌زایی و رشد ریشه در شرایط آزمایشگاهی می‌باشد. بنابراین، تکثیر از طریق کشت در شیشه، در صورت موفقیت می‌تواند گزینه‌ خوبی برای تکثیر آن باشد. هدف از این مطالعه، کشت در شیشه سرشاخه‌ها به منظور باززایی و تکثیر آن‫ها، و نیز کشت در شیشه بذر، به منظور تولید کالوس و باززایی کالوس‌ها و ریشه‌زایی آن‫ها در جمعیت رشد یافته در ذخیره‌گاه گلوچار (رابر، استان کرمان) J. seravschanica، بود. مواد و روش‌ها: شاخسارهای جوان، از ذخیره‌گاه گلوچار شهرستان رابر (استان کرمان) جمع‌آوری و به‌مدت حدود 7-3 روز در دمای 4 درجه سانتی‫گراد نگه‫داری شدند. سرشاخه‌های انتهایی با اندازه 1 تا 5/1 سانتی‌متری جدا و پس از سترون سازی، در محیط گیاهان چوبی (WPM) و محیط کشت موراشیگ و اسکوگ (MS) بدون هورمون، برای استقرار نمونه‌ها، کشت شدند. به منظور پرآوری یا شاخسارزایی، همه کشت‌ها به محیط دارای هورمون منتقل و غلظت‌های مناسب هورمونی بهینه‌سازی شد. شاخسارهای جوان به محیط ریشه‌زایی WPM، MS و ½MS دارای سطوح مختلف هورمونی IBA، منتقل شدند. دانه‌های دارای رویان از مخروط‌های ماده بالغ جدا، و پس از جمع‌آوری دانه‌های پر، دانه‌ها به‫مدت 2-1 هفته تحت تیمار سرما قرار گرفتند. سپس، ضدعفونی شده و در محیط MS(هورمون‌دار) برای بررسی رویش دانه و نیز کالوس‌زایی از رویان، کشت شدند. باززایی کالوس‌ها و تشکیل شاخساره و ریشه‌زایی آن‫ها تحت غلظت‌های مناسب هورمونی بررسی شد. نتایج: در محیط WPM، بالاترین درصد شاخسار‌زایی یا پرآوری (40 درصد)، در تیمار توام 3 میلی‌گرم در لیتر BAP و 2 میلی‌گرم در لیتر NAA بدست آمد. در محیط MS، بالاترین درصد پرآوری (57%) در محیط همراه 2/0 و 3 میلی‌گرم در لیتر بترتیب BAP و NAA مشاهده شد. در هر دو محیط، ساخسار‌های پرآوری شده، تا حدود 4 ماه پس از کشت، در محیط ریشه‌زایی، هیچ ریشه‌ای تولید نکردند. بالاترین درصد رویش دانه در محیط MS، در غلظت 5 میلی‌گرم در لیتر BAP و 2/0 میلی‌گرم در لیتر NAA، 33 درصد بود. بالاترین مقدار کالوس‌زایی از رویان (40%) در محیط کشت MS، و در غلظت 2/0 و 3 میلی‌گرم در لیتر بi‫ترتیب BAP و NAA به‫دست آمد. کالوس‌ها در محیط شاخسارزایی WPM، شاخساره تولید کردند. تشکیل ریشه تا شش ماه مشاهده نشد اما پس از هشت ماه، حدود 10 درصد شاخسار‌ها، ریشه ایجاد کردند. نتیجه‌گیری: بنظر می‌رسد عوامل مختلفی از جمله ژنوتیپ، پلی‌پلوئیدی یا تشکیل هیبرید، رشد کند گیاه که در بازدانگان معمول است، یا ترکیبات ثانویه، دلیل کم باززایی بویژه ریشه‌زایی باشد. همچنین مدت زمان کشت، می‌تواند در ریشه‌زایی موثر باشد.

https://jct.araku.ac.ir/article_710002_6444f7ebb466bd9442ea187900361fe6.pdf

دانشگاه اراک سلول و بافت 2228-7035 14 3 2023 09 23 Green Synthesis of Gold Nanoparticles Using Pimpinella affinis Leaf and Stem Extracts and Evaluation of Their Cytotoxic Effects Against Human Breast Cancer Cells Under In-vitro Condition سنتز سبز نانوذرات طلا با استفاده از عصاره برگ و ساقه گیاه اناریجه و بررسی سمیت آن بر روی سلول‌های سرطان پستان انسانی در شرایط آزمایشگاهی 217 240 710007 10.61186/JCT.14.3.217 FA کوثر اسماعیل‌پور کارشناس ارشد، بیوشیمی، علوم‌پایه، دانشگاه گیلان، رشت، ایران مصطفی شوریان هیأت‌علمی، گروه زیست‌شناسی، دانشکده علوم‌پایه، دانشگاه گیلان، رشت، ایران 0000-0002-5132-297X Journal Article 2024 01 13 Aim: Nowadays, one of the great challenges of mankind is to find a suitable way for the treatment of cancer. Recent developments show that nanotechnology has a significant impact on the prevention, diagnosis and treatment of cancer. In nanotechnology, there are different physical and chemical methods to produce nanoparticles but mostly chemical methods are used. The nanoparticles produced using these methods are harmful to health due to the absorption of chemical species on their surface. In order to eliminate this big problem, biological methods such as the use of fungi, bacteria and plants have replaced other methods for the synthesis of nanoparticles which is called green synthesis. It is cheaper, simpler and non-toxic than other methods. The use of plants for the synthesis of nanoparticles has become more important than other biological methods due to the elimination of the difficult step of cell culture maintenance. Material and Methods: In this study, gold nanoparticles were formed after treating the HAuCl4 solution with the aqueous extract of Anarijeh plant with the scientific name Pimpinella affinis. In this research, different amounts of aqueous extracts of leaves and stems of Pimpinella affinis were used for the synthesis of gold nanoparticles. UV-Visible spectroscopy and DLS methods were used to evaluate nanoparticles and determine their average size and stability. Also, SEM method was used to investigate their morphology. FTIR method was used to determine the functional groups of the aqueous extract and synthesized gold nanoparticles; in addition GC/MS device was used to determine the composition of the extract. Finally, MTT analysis was used to investigate the cytotoxic effects of nanoparticles on MCF-7 cell line along with treatments of 24, 48 and 72 hours. Results: The results of the analysis were showed that the optimal concentration of the Pimpinella affinis extract for the synthesis of gold nanoparticles is 1 mg/ml. The synthesized gold nanoparticles using the mentioned concentration of the extract have an average size of 20 nanometers with a zeta potential of -61 mV which has the best stability. They had a spherical shape with a polydispersity equal to 0.7. The results of FTIR analysis show the presence of hydroxyl, simple carbonyl groups and hydrocarbon functional groups in the compounds of the extract. Experiments showed that phenolic and carboxylic compounds play the most important role in the reduction of gold salt. Also, proteins and lipids have made gold nanoparticles stable. The essential compounds identified in the extract by GC/MS method include Phenolic and flavonoid compounds and terpenes which are confirmed by the FTIR spectrum. The treatment time of 48 hours for MCF-7 cell line is the best time for the toxicity of nanoparticles with IC50 equal to 384.2 µg/ml, which was determined by MTT analysis. Conclusion: According to the above findings, it can be concluded that Pimpinella affinis is one of the suitable options for the synthesis of gold nanoparticles, and it can be done with more studies on nanoparticles synthesized using this plant, considered it as one of the efficient methods to achieve the goal of proper treatment for breast cancer. هدف: فناورینانو تأثیر بهسزایی در درمان بیماری سرطان دارد. روشهای ساخت نانوذرات به کمک مواد زیستی که بهآنها سنتز سبز میگویند بهدلیل ارزانتر و غیرسمی بودن نسبت به سایر روشها برای سنتز نانوذرات برتری دارند. مواد و روشها: در این مطالعه، پس از تیمار محلول HAuCl4 با غلظتهای مختلف عصارهی آبی برگ و ساقهی گیاه اناریجه با نام علمی Pimpinella affinis، نانوذرات طلا تشکیل شدند. برای مشخصهیابی نانوذرات طلای سنتز شده از طیفسنجی UV-Visible، دستگاه DLS، SEM و FTIR و همچنین از دستگاه GC/MS برای تعیین ترکیبات عصاره استفاده شد. آثار سمیت سلولی نانوذرات طلا و عصارهی گیاهی با استفاده از رنگسنجیMTT بر روی ردهسلولی MCF-7 همراه با تیمارهای 24، 48 و 72 ساعت مورد بررسی قرار گرفت. نتایج: نانوذرات طلای سنتز شده با استفاده از غلظت 1 mg/ml از عصاره به عنوان غلظت بهینه در نظر گرفته شد که دارای میانگین اندازه 20 نانومتر و پتانسیلزتا 61- میلیولت بودند. نانوذرات طلا دارای شکل کروی همراه با چندپراکندگی برابر 7/0 بودند و ترکیبات فنولی و کربوکسیلی و ترپنها بیشترین نقش را در تشکیل و پایداری نانوذرات طلا ایفا نمودند. ترکیبات اساسی شناسایی شده در عصاره توسط روش GC/MS شامل ترکیبات فنولی، فلاونوئیدی و ترپنها بود. در روش MTT، برتری سمیتسلولی نانوذرات طلا علیه سلولهای MCF-7 نسبت به عصاره و زمان تیمار ۴۸ ساعت، همراه با IC50 برابر با µg/ml 2/384 بهدست آمد. نتیجهگیری: یافتههای فوق نشان می دهد که استفاده از گیاه اناریجه در ساخت نانوذرات طلا میتواند برای درمان سرطان پستان مؤثر واقع شود.

https://jct.araku.ac.ir/article_710007_c25f2f612dde293ec2155a5dfe7901f2.pdf

دانشگاه اراک سلول و بافت 2228-7035 14 3 2023 09 23 Genome Editing Technologies and Application in Medicine: Discoveries, Challenges, and Prospects فناوری‌های ویرایش ژنوم و کاربرد آن در پزشکی: یافته‌ها، چالش‌ها و چشم‌انداز 241 263 710021 10.61186/JCT.14.3.241 FA ریحانه لهراسبی پژوهشگاه رویان، پژوهشکده زیست شناسی و علوم پزشکی تولید مثل جهاد دانشگاهی، مرکز تحقیقات پزشکی تولید مثل، گروه ژنتیک، تهران، ایران امیر امیری‌یکتا پژوهشگاه رویان، پژوهشکده زیست شناسی و علوم پزشکی تولید مثل جهاد دانشگاهی، مرکز تحقیقات پزشکی تولید مثل، گروه ژنتیک، تهران، ایران Journal Article 2024 01 13 Aim: A multitude of devastating human diseases arise from genetic mutations that lead to cellular dysfunction, as well as from infectious diseases and cell transformation. These diseases have significantly impacted individuals and communities worldwide and led to challenges in medical and biological sciences to address their causes and improve treatment approaches. Since identifying genes as the main heredity unit, generating targeted alterations in specific gene loci for treatment and perception of disease function has been a crucial concern. The discovery of nuclease enzymes revolutionized this field and transformed the concept of genome editing from a dream to a tangible reality. Currently, targeted gene editing and modification through techniques such as zinc finger nuclease (ZFN), transcription activator-like effector nuclease (TALEN), and clustered regulatory interspaced short palindromic repeat Cas-associated nuclease (CRISPR/Cas) offers robust methods to assess gene function, also precisely and efficiently manipulate cells behavior. ZFN and the TALEN were the earliest gene editing approaches that developed, which rely on the FokI enzyme and engineered protein that binds to a specific sequence in the genome and induces double-strand breakage, stimulating the cell's repair mechanisms. Although these techniques led to many significant discoveries and developments in gene editing, they had limitations such as complexity and high prices. The emergence of CRISPR/Cas technology propelled gene editing to a new stage of efficiency and accessibility. This technique utilizes RNA to guide the Cas enzyme to the target gene sequence and, like the ZFN and TALEN, creates a double-strand breakage, which triggers DNA repair mechanisms. CRISPR/Cas is a versatile, simple, and cost-effective revolutionary gene-manipulating tool that enabled researchers to explore the potential of gene editing in a wide application range. Base and Prime editors are the latest systems in the genome manipulation area, which, based on the CRISPR/Cas technique, represent the impressive development and improvement in gene editing capabilities. Despite the others, these two technologies induce the single-strand breakage and modify at the nucleotide level in target sequences. The ability to edit genes indicates new possibilities for treating genetic diseases and even preventing them before they appear. Nowadays, a growing number of clinical trials utilizing genome editing for therapeutic purposes are underway, thanks to the substantial advancements in these tools. These remarkable improvements hold promise in treating various diseases and improving patient’s outcomes. However, despite the outstanding progress made in gene editing technology, there are still several challenges and obstacles, such as ethical considerations, off-target effects, and safety concerns, which still need more investigation and studies. Consequently, ongoing researches are focused on developing the accuracy and efficacy of these editing tools. Conclusion: The advancement of gene editing technology has opened up a new way in medical and biological sciences to modify and manipulate the genome, also exploring the various diseases caused. مقدمه: بسیاری از بیماری‌های ویرانگر انسانی در اثر ایجاد جهش در ژنوم و بروز اختلال عمل‫کرد در سلول، تغییرات ژنتیکی حاصل از بیماری‌های عفونی و یا تغییرات سلولی رخ می‌دهند. از زمان شناسایی ژن به‫عنوان واحد اصلی وراثت، توانایی ایجاد تغییر در محل بهخصوصی از ژنوم انسان به‫منظور درمان و درک بهتر عملکرد بیماری‌ها، هدفی مهم در علوم پزشکی و زیست‌شناسی بوده است. نتیجه‌گیری: اصلاح ژن به‫صورت هدفمند از طریق ابزارهایی مانند ZFN، TALEN و CRISPR/Cas یک تکنیک قدرتمند جهت ارزیابی عملکرد ژن و همچنین دستکاری دقیق رفتار و بازده‌ی سلول بوده و امروزه با توسعه و پیشرفت چشمگیر ابزارهای ویرایش ژنوم، تعداد بسیاری کارآزمایی بالینی مبتنی بر این روش با هدف درمان انواع بیماری‌ها در حال انجام است. هدف: در این مقاله به‫طور خلاصه پیشینه، مراحل پیشرفت ابزارهای ویرایش ژنوم و همچنین کاربردهای این روش نوظهور را در پزشکی بازگو کرده و چالش‌های پیش روی آن را بیان می‌کنیم.

https://jct.araku.ac.ir/article_710021_2d3207cda25f825bab8111ea86190c6e.pdf

دانشگاه اراک سلول و بافت 2228-7035 14 3 2023 09 23 Optimization of hairy root induction and producing high vindoline and catharanthine clones in Catharanthus roseus through Transformation by Agrobacterium rhizogenes بهینه‌سازی القای ریشه‌ مویین و تولید کلون‌های ریشه مویین با میزان بالای وین‌دولین و کاتارانتین در گیاه Catharanthus roseus از طریق تراریختی توسط Agrobacterium rhizogenes 264 276 710024 10.61186/JCT.14.3.564 FA وجیهه کاردوست پاریزی کارشناسی ارشد، گروه ژنتیک و تولید گیاهی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه ولی‌عصر (عج) رفسنجان، ایران محسن محمودنیا میمند دکتری تخصصی، گروه ژنتیک و تولید گیاهی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه ولی‌عصر (عج) رفسنجان، ایران 0000-0001-6824-7630 Journal Article 2024 01 13 Aim: Hairy roots induced by inoculation with Agrobacterium rhizogenes are suitable for the production and accumulation of plant secondary metabolites. Genetically modified hairy roots produce valuable secondary metabolites to a greater amount and with more genetic stability than cell suspension cultures and normal roots. Catharanthus roseus is one of the most important medicinal plants that produces valuable secondary metabolites such as indole alkaloids. The purpose of this research was to investigate the effect of factors influencing the induction of hairy roots and to investigate the amount of production of secondary metabolites (vindoline and catharanthine) in the hairy roots produced by inoculation of C. roseus plant with A. rhizogenes. Material and Methods: In order to produce sterile C. roseus seedlings and to prepare explants, seeds cultured on MS culture medium. The effect of the type of culture medium (MS, 1/2 MS and B5), the type of explant (leaf and stem), the type of bacterial strain (A4, 1132 and 2656) and the type of plant genotype (white and red) on the amount of hairy root induction in a completely randomized design was investigated. Extraction of samples was done using methanol solvent, then the amount of indole alkaloids was calculated using HPLC method and standard curve. The nature of transgenic hairy roots was confirmed after DNA extraction from different samples using PCR method with specific primers (rolB and virD). Results: According to the results, the most efficient strain in transferring T-DNA to the explants and the appearance of hairy roots was related to A4 strain (53.8%). 1/2 MS culture medium with 77.69% of root induction was the best medium combination for the appearance of hairy roots. Also, white genotype (62% rooting) and leaf explant (77% rooting) were identified as the best genotype and explant for the production of hairy roots. After the specific amplification of the rolB gene and the lack of amplification of the virD gene in the PCR reaction in the samples, the molecular confirmation of the transgenic nature of the hairy root clones was done. Based on the results of HPLC experiment, the average amount of vindoline and catharanthine in hairy roots (0.24 and 0.615 mg/g dry weight) is higher than aerial parts (0.106 and 0.488 mg/g dry weight) and normal root (0.021 and 0.013 mg/g dry weight). The amount of these alkaloids in the aerial parts was higher than in the normal roots of the plant. Conclusion: The production of hairy roots in response to the inoculation of plant explants with A. rhizogenes is influenced by various factors such as the type of explant, the genotype of the plant, the strain of bacteria and the composition of culture medium. These factors must be optimized to establish effective hairy root cultur in a plant. It seems that with the introduction of rol genes from bacteria to the plant genome (hairy root) and as a result of the change in the amount of endogenous hormone production and the response of the plant cell to the entry of bacterial genes, the amount and profile of the production of the secondary metabolites of the plant will change. As a result, by selecting clones with increased production of medicinally important alkaloids and optimizing the conditions of large scale production of secondary metabolites in bioreactors, we can move towards the commercial production of these compounds through cell and plant tissue culture. هدف: هدف از این تحقیق بررسی اثر عوامل تاثیرگذار بر القای ریشه مویین و بررسی میزان تولید آلکالوئیدهای ایندولی در ریشههای مویین تولید شده در اثر تلقیح گیاه پروانش با Agrobacterium rhizogenes بود. مواد و روشها: از گیاهچه استریل پروانش جهت تهیه ریزنمونه استفاده شد. اثر نوع محیط کشت، ریزنمونه، سویه باکتری و ژنوتیپ گیاه بر میزان القای ریشه مویین بررسی شد. میزان آلکالوئیدهای ایندولی با استفاده از دستگاه HPLC اندازهگیری شد. ماهیت تراریختگی ریشههای مویین با استفاده از روش PCR و پرایمرهای اختصاصی تایید گردید. نتایج: سویه A4 به‫عنوان بهترین سویه A. rhizogenes جهت القای ریشه مویین و محیط کشت MS به‫عنوان بهترین محیط کشت برای توسعه و استقرار کشت ریشه مویین در ژنوتیپ سفید پروانش تعیین شدند. نتایج حاصل از تکثیر اختصاصی ژن‌های rolB و virD نشان دهنده ماهیت تراریختی ریشه‌های مویین بود. به‫طور کلی مقدار ویندولین و کاتارانتین ریشههای مویین بیشتر از ریشه معمولی و اندام‌ هوایی گیاه پروانش بـود. از طرفـی، مقـدار این آلکالوئیـدها در اندام هوایی گیاه از ریشه معمولی بـالاتر بـود. نتیجهگیری: به‫نظر میرسد با ورود ژنهای rol از باکتری به ژنوم گیاه و ایجاد ریشه مویین و در نتیجه تغییر در میزان تولید هورمونهای درونزا و پاسخهای سلول گیاهی به ورود ژنهای باکتری، میزان و پروفایل تولید متابولیتهای ثاتویه گیاه تغییر پیدا میکند و در نتیجه میتوان با گرینش کلونهایی با افزایش تولید آلکالوئیدهای مهم دارویی و بهینه سازی شرایط تولید انبوه متابولیتها در بیوراکتورها، به سمت تولید تجاری این ترکیبات از طریق کشت سلول و بافت گیاهی حرکت کرد.

https://jct.araku.ac.ir/article_710024_fc047c91d2d56439343cbc6688d07676.pdf