دانشگاه اراک سلول و بافت 2228-7035 4 زمستان92 2014 03 01 Apoptosis Will be Increased after 2h Incubation of Human Sperm at 37°C افزایش شکستگی DNA اسپرم انسان بعد از دو ساعت انکوباسیون 415 423 4985 10.52547/JCT.4.4.415 FA Journal Article 2014 03 16 Aim: The main goal was to evaluate the impact of different incubation time intervals on human sperm DNA status using terminal deoxyribonucleotidyl transferase–mediated dUTP nick-end labeling (TUNEL) test. <br />Material and methods: This prospective study involved 21 normozoospermic specimens. After direct swim-up, sperm cells were incubated at 37^°C and DNA damage was evaluated at different time intervals (0, 1, 2 and 3 h).  After slide fixation with methanol 100% for 4 minutes and rinse in phosphate-buffered solution (PBS), TUNEL was added to each slide and incubated for 60 minute in dark. Eosin-Nigrosin and Papanicolaou staining protocols were applied in order to assess sperm viability and morphology, respectively. <br />Results: Sperm viability and normal morphology was improved after sperm processing (100%, 72.3% respectively, p < 0.0001). The rate of DNA damage was significantly higher after 2h compared to 0h (9.19±0.8% Vs 4.9±0.9%, respectively, p=0.008). Also there was significant difference in abnormal sperm DNA between 3h and 1h (10.95±0.7% Vs 7.1±1%, respectively, p=0.020). <br />Conclusion: Incubation of prepared normozoospermic samples at 37^°C more than 2 h may be associated with sperm DNA fragmentation. Therefore, it seems that incubation of human spermatozoa at 37^°C should be limited up to 2h prior to use in ART clinics.  هدف: در این مطالعه میزان شکستگی DNA اسپرم انسانی بعد از آماده سازی به‏روش Direct swim-up در زمان‏های مختلف انکوباسیون به‏وسیله تکنیک TUNEL مورد ارزیابی قرار گرفت تا بهترین زمان برای انکوباسیون اسپرم‏های نرمال شسته شده برای استفاده در تکنیک‏های کمک باروری (ART) به‏دست آید.<br />مواد و روش‏ها: در این مطالعه آینده نگر، 21 نمونه‏ی اسپرم نرمال مورد مطالعه قرار گرفت. از لام Makler chamber برای مطالعه تعداد و قابلیت تحرک اسپرم استفاده شد. برای بررسی مورفولوژی اسپرم از رنگ آمیزی  پاپانیکولا و قابلیت حیات اسپرم از رنگ آمیزی ائوزین-نیگروزین استفاده شد. نمونه‏ها بعد از آماده سازی به‏روش Direct swim-up در زمان های مختلف در دمای 37 درجه سانتی‏گراد انکوبه شدند. میزان شکستگی  DNA اسپرم در فواصل زمانی مختلف (3،2،1،0 ساعت) با استفاده از تکنیک TUNEL مورد ارزیابی قرار گرفت.<br />نتایج: میانگین درصد مورفولوژی طبیعی و حرکت سریع پیشرونده اسپرم بعد از آماده سازی نسبت به قبل از آماده سازی افزایش معنی‏داری 001/0>P داشتند. درصد میانگین قابلیت حیات اسپرم بعد از آماده سازی اسپرم  نسبت به قبل از آماده‏سازی به‏طور معنی‏دار افزایش یافته بود (001/0>P). درصد شکستگی DNA اسپرم در زمان دو ساعت انکوباسیون نسبت به زمان صفر  (01/0>P) و نیز زمان سه ساعت نسبت به‏زمان صفر و یک ساعت انکوباسیون (001/0>P) به‏طور معنی‏داری افزایش داشت.<br />نتیجه گیری: انکوباسیون اسپرم نرمال در دمای 37 درجه سانتی‏گراد که به روش Direct swim-up آماده شده برای استفاده در تکنیک‏های کمک باروری باید زمان کمتر از دو ساعت باشد.<br />واژگان کلیدی:   https://jct.araku.ac.ir/article_4985_785ca71d2c85e3f3774baaf438c5c6eb.pdf