دانشگاه اراک سلول و بافت 2228-7035 4 تابستان 92 2013 10 01 Comparison of DBAT Gene Sequence, in Nucleotide and Amino Acid Level, in Yew Species and Fungal Endophytes مقایسه توالی ژن DBAT، در سطح نوکلئوتیدی و آمینواسیدی، در گونه‮های سرخدار و قارچ های اندوفیت 197 203 3317 10.52547/JCT.4.2.197 FA Journal Article 2013 10 08 Aim: The aim of this study was investigation of the presence<em> DBAT</em> gene, a key gene in the biosynthetic pathway of taxol, in yew (<em>Taxus baccata</em>) and its taxol producing endophytic fungus and also assessment the similarity of these sequences with sequences available in GenBank. <br />Material and Methods: In this study, endophytic fungi were isolated from the bark of <em>Taxus baccata</em> and purified, using hyphal tip method. Genomic DNA of yew tree and a taxol producing fungus (T9 isolate) was extracted. Using polymerase chain reaction, presence of <em>DBAT</em> gene was investigated. After sequencing, similarity of sequences obtained from yew and T9 isolate with other taxus species and endophyticn fungi sequences, available in GenBank, were compared. <br />Results: Using specific primers, a 125 bp fragment of <em>DBAT</em> gene from <em>Taxus baccata</em> and T9 isolate was amplified. Nucleotide and amino acid sequences alignment showed that theses sequences had a high similarity (over 98%) in fungus and host plant. Alignment results of these sequences with other species of yew trees and endophytic fungi sequences also showed very high similarity (98-100%). Besides, relatively high similarity between the nucleotides and amino acid sequences of <em>DBAT</em> and other acyl/aroyltransferases enzymes involved in taxol biosynthesis were observed. <br />Conclusion: Based on the results, the presence of <em>DBAT</em> gene in taxol producing endophytic fungus and also very high homology of its sequence, in nucleotide and amino acid levels, with host plant (<em>Taxus baccata</em>) and other yew species and fungal endophytes were proved. هدف: هدف از این تحقیق، بررسی حضور ژن <em>DBAT</em>، یکی از ژن‌های کلیدی در مسیر بیوسنتزی تاکسول، در سرخدار (<em>Taxus baccata</em>) و قارچ اندوفیت مولد تاکسول آن و نیز بررسی میزان شباهت این توالی‌ها با توالی‌های موجود در بانک ژن بود.<br />مواد و روش‌ها: در این تحقیق، قارچ‌های اندوفیت از پوست درخت سرخدار جداسازی و به روش نوک هیف خالص‌سازی شدند. DNA ژنومی درخت سرخدار و یکی از قارچ‌های مولد تاکسول (ایزوله T9) استخراج گردید. حضور ژن <em>DBAT</em> به‏وسیله واکنش زنجیره‏ای پلیمراز بررسی گردید. پس از توالی‌یابی، میزان شباهت توالی‌های به‏دست آمده از سرخدار و ایزوله T9 با توالی‌های سایر گونه‌های سرخدار و قارچ‏های اندوفیت، موجود در پایگاه بانک ژن، مقایسه شدند.<br />نتایج: با استفاده از پرایمرهای اختصاصی، یک قطعه bp 125 از ژن <em>DBAT</em> سرخدار و ایزوله T9 تکثیر گردید. هم‏ردیفی توالی نوکلئوتیدی و آمینواسیدی قارچ و گیاه میزبان نشان داد که این توالی‌ها دارای شباهت بسیار بالایی (بیش از 98درصد) بودند. نتایج هم‏ردیفی این توالی‌ها با توالی‌های گونه‌های دیگر سرخدار و قارچ‌های اندوفیت، نیز شباهت بسیار بالایی (98 تا100 درصد) را نشان داد. همچنین، شباهت نسبتا بالایی در توالی نوکلئوتیدی و آمینواسیدی آنزیم DBAT و سایر آنزیم‏های آسیل و آروئیل ترانسفراز درگیر در مسیر بیوسنتزی تاکسول مشاهده شد.<br />نتیجه‌گیری: براساس نتایج، حضور ژن <em>DBAT</em> در قارچ اندوفیت مولد تاکسول جداشده از سرخدار و همچنین شباهت بسیار بالا آن، در سطح نوکلئوتیدی و آمینواسیدی، با توالی بدست آمده از ژن <em>DBAT </em>میزبان (<em>Taxus baccata</em>) و توالی گونه‌های دیگر سرخدار و نیز قارچ‌های اندوفیت به اثبات رسید https://jct.araku.ac.ir/article_3317_2c758933af02c0b301906f2819ae1268.pdf