دانشگاه اراک سلول و بافت 2228-7035 8 4 2017 12 22 Isolation, Culture and characterisation of Adipose Tissue-Derived Mesenchymal Stem Cells (ADMSCs) by Explant-Enzymatic Methods جداسازی، کشت و تعیین هویت سلول‌های بنیادی مشتق از بافت چربی با استفاده از روش اکسپلنت_آنزیمی 303 313 31085 10.52547/JCT.8.4.303 FA محمد حسین محمدی مهدی آبادی حسنی دانشگاه خوارزمی، دانشکده علوم زیستی، گروه علوم جانوری، تهران، ایران محمد نبیونی دانشگاه خوارزمی، دانشکده علوم زیستی، گروه سلولی و مولکولی، تهران، ایران 0000-0002-0349-6676 کاظم پریور گروه علوم جانوری، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه خوارزمی، تهران سیامک یاری گروه زیست‌شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه بوعلی سینا، همدان علیرضا صاحبی گروه علوم جانوری، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه خوارزمی، تهران Journal Article 2018 05 15 <strong>Aim:</strong> In this study, we use combination of enzymatic and explant methods, for isolation and culture of ADMSCs. <br /><strong>Materials and Method:</strong> Adipose tissues dissected out from the abdominal region of male Wistar rats. Tissues were minced into small pieces (1-2 mm), and then treated with trypsin-EDTA 0.25% for 30 minutes at 37 ̊C in shaker-incubator. Enzymatic treated tissues were centrifuged and floating parts were cultured. Statistical analysis of the cells number was investigated using GraphPad Prismv6 software. <br /><strong>Results:</strong> Results showed that ADMSCs isolated with our methods have growth characteristics similar to conventional methods. ADMSCs were maintained up to 10th passage and exhibited a homogeneous population in terms of appearance and morphology. We demonstrated that ADMSCs by these combination methods have mesenchymal characteristic markers (positive for CD90, CD44, CD73, CD105 and negative for CD35, CD45, CD11b). <br /><strong>Conclusion:</strong> In the current study, we showed that the combination of enzymatic and explant methods creates a simple, inexpensive and reproducible method for isolation and culture of ADMSCs. <br />  <strong>هدف:</strong> در این مطالعه، ترکیبی از روش آنزیمی و اکسپلنت را برای جداسازی و کشت سلول­های بنیادی چربی مورد استفاده قرار گرفت.<br /><strong>مواد و روش­ها:</strong> بافت چربی ناحیه­ی شکم از رَت­های نر نژاد ویستار جدا شد. بافت­ها به قطعات کوچک (mm2≈( تقسیم شدند، سپس آنزیم Trypsin –EDTA با غلظت 25/0 درصد به بافت­ها افزوده شد و به‫دنبال آن به‫مدت 30 دقیقه در دمای 37 درجه سانتی­گراد در انکوباتور شیکردار قرار داده شدند. سپس بافت تیمار شده با آنزیم سانتریفیوژ شده و قطعات شناور کشت داده شدند. آنالیزهای آماری  مربوط به تعداد سلول­ها  با استفاده از نرم افزار GraphPad Prismv6 مـورد بررسـی قرار گرفت.<br /><strong>نتایج:</strong> نتایج نشان داد که جمعیت سلول­های بنیادی چربی جداسازی شده توسط این روش ترکیبی، تحت تاثیر تنش کمتری قرار خواهند گرفت و جمعیت سلولی همگن و مشابهی را از لحاظ ظاهری و ریخت­شناسی نشان خواهند داد و نیز آنالیز فلوسایتومتری مارکر­های سطحی نشان داد که این سلول­ها برای CD73، CD105، CD44 و CD90  مثبت و برای CD34، CD45 و CD11b  منفی بودند<br /><strong>نتیجه</strong><strong>­</strong><strong>گیری:</strong> در این مطالعه نشان داده شد که سلول­های بنیادی مشتق از بافت چربی رت می­تواند با روش جدید اکسپلنت_آنزیمی جداسازی شوند که این روش، یک روش کشت سلولی با قابلیت تکرارپذیری بالا و بسیار به صرفه از لحاظ اقتصادی برای کاربردهای کلینیکی می­باشد.<br />  https://jct.araku.ac.ir/article_31085_69c263f51349413d34f878c7f6b06144.pdf