دانشگاه اراک سلول و بافت 2228-7035 8 1 2017 03 21 Study the effects of some acute environmental conditions on recombinant Hsp70 protein expression in Rutilus Frissi Kutum liver in E. coli مطالعه تاثیر برخی شرایط حاد محیطی بر میزان بیان پروتئین Hsp70 نوترکیب کبد ماهی Rutilus Frissi Kutum در باکتری E. coli 32 41 26496 10.52547/JCT.8.1.32 FA امید صابری گروه زیست شناسی، دانشگاه گیلان، پردیس دانشگاهی2، رشت، ایران حسین غفوری گروه زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه گیلان، رشت، ایران Journal Article 2017 03 21 <strong>Aim:</strong> The aim of the present study was to investigate the optimal expression of Hsp70 recombinant <em>Rutilus </em><em>Frissi</em><em>Kutum</em> liver in <em>E. coli</em>. <br /><strong>Material and methods:</strong> To evaluating of expression level of recombinant Hsp70, transformed <em>E. coli</em> were cultured in LB medium at 2, 4, 8, 12, 24, 36 and 48 hours, 20, 25, 30, 37 and 50 °C, extreme pH (5 and 9) and in present of heavy metals e.g. mercury, cobalt, iron, zinc and etc. Expression of recombinant Hsp70 protein was determined by SDS-PAGE 12% analysis of <em>E. coli</em> extracts followed by staining with Coomassie Blue. <br /><strong>Results:</strong> Optimum expression of recombinant Hsp70 was obtained at 4 and 8 h, 37 °C and pH 5. Additionally, the maximum and minimum expression of this protein was achieved in present of manganese and cobalt respectively. The results further indicate that the survival of <em>E. coli </em>with Hsp70 was enhanced compared to the control cells. <br /><strong>Conclusion:</strong> All results reveal that transformed bacteria are able to survive against extreme environmental conditions compared to control sample, because of having recombinant Hsp70. This heat-shock protein protects vital proteins from denaturing by its chaperone property. So, growth condition described in this study can be used for optimizing production of recombinant Hsp70 in <em>E. coli</em> host. <br />  <br />  <strong>هدف: </strong>هدف مطالعه حاضر بررسی بیان بهینه Hsp70 نوترکیب کبد ماهی <em>Rutilus </em><em>Frissi</em><em> Kutum</em> در باکتری <em>E. coli</em> می باشد.<br /><strong>مواد و روش‏ها: </strong>به‏منظور بررسی میزان بیان پروتئین Hsp70 نوترکیب، باکتری <em>E. coli</em> ترانسفورم شده در محیط LB در زمان‏های 2، 4، 8، 12، 24، 36 و 48 ساعت، دماهای 20، 25، 30، 37، 45 و 50 درجه سانتی‏گراد، شرایط pH افراطی (5 و 9) و نیز در حضور فلزات سنگین همانند نقره، کبالت، آهن، کروم، جیوه، سرب، روی، کادمیوم، منگنز و نیکل کشت داده شد سپس با تهیه­ی عصاره­ی سلولی، میزان بیان Hsp70 با استفاده از SDS-PAGE  12 درصد مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت و رنگ آمیزی با کوماسی بلو صورت گرفت.<br /><strong>نتایج: </strong>بیان بهینه پروتئین Hsp70 نوترکیب در زمان 4 و 8  ساعت، دمای 37 درجه سانتی‏گراد و  pH برابر 5 صورت گرفت. به‏علاوه در حضور نمک های فلزات منگنز و کبالت، به‏ترتیب بیشترین و کمترین میزان بیان پروتئین نوترکیب مشاهده شد. همچنین <em>E. coli</em> دارای Hsp70 در مقایسه با باکتری کنترل، نسبت به NaCl تحمل و رشد بیشتری دارد.<br /><strong>نتیجه گیری: </strong>همه<strong>  </strong>نتایج حاصل از مطالعه نشان می­دهد باکتری ترانسفورم شده در مقایسه با باکتری کنترل به‏دلیل دارا بودن  Hsp70 نوترکیب در برابر شرایط حاد محیطی قادر به بقا بوده است. پروتئین Hsp70 نوترکیب با خاصیت چاپرونی خود از واسرشت شدن پروتئین­های حیاتی جلوگیری کرد است. بنابراین شرایط رشد توصیف شده در این مطالعه می تواند برای تولید بهینه پروتئین Hsp70 نوترکیب در میزبان <em>E. coli</em> استفاده گردد. https://jct.araku.ac.ir/article_26496_1697fe5eb0141dca1379090a4d766cc7.pdf