عباس رحیمی شم آبادی؛ موسی گردانه؛ عمران اسماعیل زاده
چکیده
هدف: با تلفیق سیستم االقایی تتراسیکلین (Tet-inducible system) و ناقلین لنتی ویروسی، القا بیان ژن گزارشگر Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) در سلول‌های پرندگان مورد بررسی قرار گرفت. مواد و روشها: ژن EGFP تحت کنترل سیستم Tet-ON قرار گرفت و بیان آن در سلول‌های کبدی جوجه رده LMH بررسی شد. ابتدا باکتریهای مستعد با ناقل لنتی ویروسی القایی حامل EGFP بههمراه ...
بیشتر
هدف: با تلفیق سیستم االقایی تتراسیکلین (Tet-inducible system) و ناقلین لنتی ویروسی، القا بیان ژن گزارشگر Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) در سلول‌های پرندگان مورد بررسی قرار گرفت. مواد و روشها: ژن EGFP تحت کنترل سیستم Tet-ON قرار گرفت و بیان آن در سلول‌های کبدی جوجه رده LMH بررسی شد. ابتدا باکتریهای مستعد با ناقل لنتی ویروسی القایی حامل EGFP بههمراه یک ناقل دوم که فعال کننده Tet (Tet-transactivator) بهنام rtTA-M2 را حمل میکرد ترانسفورم شده و ذخیره ماکسی پرپ خالصی از هریک از ایندو DNA پلاسمیدی فراهم شدند. سپس با روش رسوب DNA-فسفات کلسیم سلول‌های LMH با ذخیره هردو پلاسمید ترانسفکت شد. در مرحله بعد، غلظتهای سریالی از آنالوگ Tet یعنی داکسی سیکلین را به محیط کشت سلول اضافه نمودیم بهطوریکه با افزایش غلظت DOX، بیان EGFP بیشتر القا گردید. نتایج: افزایش غلظت داکسی سایکلین افزایش بیان را به دنبال داشت. در 24 ساعت اول بعد از ترانسفکشن بیان بهترتیب برای غلظتهای 0 ، 01/0 ، 1/0 و 1 میکروگرم بر میلیلیتر داکسی سایکلین 4/0، 2/6 ، 3/10و 16 درصد و در 24 ساعت دوم بهترتیب 4/6 ، 26 ، 3/28 و7/29بود.با این .جود، افزایش بیش از حد غلظت داکسی سایکلین باعث مرگ سلول‌ها گردید. نتیجه گیری: تلفیق سیستمهای القایی Tet با منشا باکتریایی و لنتی ویروسهای نوترکیب مرتبط با انتقال ژن به سلول‌های انسانی میتواند باعث القا ژن در سلول‌های پرندگان شود. غلظت القا کننده بر میزان القا بیان ترانسژن تاثیر مستقیم میگذارد.
