سعادت الله غفاری؛ علی اصغر دلدار؛ علی بهرامی؛ عمران اسماعیل زاده؛ بهارک مهیاد؛ فاطمه روح الله
چکیده
هدف: هدف این پژوهش کلون سازی و بیان ژن کد کنندهی میدکاین انسانی در اشریشیاکولای بوده که پس از انجام مراحل لازم در مقیاس آزمایشگاهی محقق گردید.مواد و روش‌ها: روش‌ها شامل کشت سلول، استخراج RNA، ساخت cDNA، تکنیک‌های کلون‌سازی، القای بیان با IPTG (ایزوپروپیل‌تیوگالاکتوزیداز)، ارزیابی بیان بهوسیلهی ژل پلی‌اکریل‌آمید و تایید توسط ...
بیشتر
هدف: هدف این پژوهش کلون سازی و بیان ژن کد کنندهی میدکاین انسانی در اشریشیاکولای بوده که پس از انجام مراحل لازم در مقیاس آزمایشگاهی محقق گردید.مواد و روش‌ها: روش‌ها شامل کشت سلول، استخراج RNA، ساخت cDNA، تکنیک‌های کلون‌سازی، القای بیان با IPTG (ایزوپروپیل‌تیوگالاکتوزیداز)، ارزیابی بیان بهوسیلهی ژل پلی‌اکریل‌آمید و تایید توسط وسترن بلات بود.نتایج: ژن میدکاین در pET-21a(+) کلون و سپس به اوریگامی منتقل شد. این فاکتور رشد در کلونی حاوی pET-21a(+) نوترکیب پس از 16 ساعت انکوباسیون در دمای 18 درجه سانتیگراد با هم زدن در 250 دور در دقیقه، در سطح سیتوپلاسمی بیان گردید. بیان پروتئین 13 کیلودالتونی دارای دم هیستیدینی از طریق وسترن بلات مورد تایید قرار گرفت.نتیجهگیری: باتوجه به اینکه سویه اوریگامی در ژن های TrxB و gor جهش یافته است، سینوپلاسم محیطی اکسید کننده می باشد، بههمین سبب باعث افزایش تشکیل باندهای دی سولفید میشود. بنابراین بهنظر میرسد که پس از بیان میدکاین، باقی ماندههای سیتوزین بهصورت محلول باقی میمانند. این شرایط باعث بهوجود آمدن محیط مناسبی برای فولدینگ صحیح پروتئین و حل شدن آن میشود.
