حمیده روحانی نژاد؛ ساناز یاری؛ علی اصغر دلدار؛ امیر اشکان حمیدی
چکیده
هدف: در قرن حاضر، تولید داروهای نوترکیب افزایش یافته است. از جمله این داروها، هورمون رشد میباشد که بهعلت مشکلاتی که در پروسهی بیان نوع سیتوپلاسمی و پری پلاسمی این پروتئین وجود دارد، یافتن راه حلی که بتواند بیان را بهینه نماید ضروری بهنظر میرسد. لذا در این تحقیق با استفاده نمودن از trx-tag بیان هورمون رشد را بهصورت محلول ...
بیشتر
هدف: در قرن حاضر، تولید داروهای نوترکیب افزایش یافته است. از جمله این داروها، هورمون رشد میباشد که بهعلت مشکلاتی که در پروسهی بیان نوع سیتوپلاسمی و پری پلاسمی این پروتئین وجود دارد، یافتن راه حلی که بتواند بیان را بهینه نماید ضروری بهنظر میرسد. لذا در این تحقیق با استفاده نمودن از trx-tag بیان هورمون رشد را بهصورت محلول بهینه شد که علاوه بر افزایش بیان پرتئین (حل مشکل پری پلاسمی) از تشکیل انکلوزیون بادی (مشکل سیتوپلاسمی) جلوگیری مینماید.مواد و روشها: سنتز ژن و کاست ژنی بهمنظور بیان هورمون رشد در سیستم بیانی pET 32a صورت گرفت. کاست ژنی شاملtrx-tag برای محلول سازی پروتئین،His tag بهمنظور خالص سازی و انتروکیناز در ابتدای ژن rHgh بهمنظور جداسازی برچسب های قبلی از این پروتئین میباشد.نتایج: بعد از کلون سازی این ژن در وکتور و بیان آن، تایید آن توسط وسترن بلات صورت گرفت. نتایج بهدست آمده با استفاده از نرم افزارهای آنالیز ژل درصد بیانی حدود از کل بیان را در سویه نوترکیب نشان میدهد.نتیجه گیری: در این تحقیق، نشان داده شد که با استفاده از Trx-tag میتوان پروتئین را بهحالت محلول در آورد و میزان بیان را بالا برد در ادامه با انجام مراحل تخمیر و پایین دستی میتوان به نتایج بهتری دست یافت.
