سارا انصاری؛ ماریه سقائیان جزی؛ سارا سلمانیان؛ سید محمود عرب نجفی
چکیده
هدف: روشهای متعددی برای وارد کردن مواد ژنتیکی خصوصا DNA بهداخل سلولهای حیوان بهکار گرفته شدهاند. روش وابسته به فسفات کلسیم روشی آسان و ارزان قیمت است با اینحال این روش برای ترانسفکشن عدهای از سلولهای حیوانی کارایی مناسبی ندارد. در این مطالعه تلاش بر این بود که بتوان کارایی ترانسفکشن با واسطه فسفات کلسیم را افزایش ...
بیشتر
هدف: روشهای متعددی برای وارد کردن مواد ژنتیکی خصوصا DNA بهداخل سلولهای حیوان بهکار گرفته شدهاند. روش وابسته به فسفات کلسیم روشی آسان و ارزان قیمت است با اینحال این روش برای ترانسفکشن عدهای از سلولهای حیوانی کارایی مناسبی ندارد. در این مطالعه تلاش بر این بود که بتوان کارایی ترانسفکشن با واسطه فسفات کلسیم را افزایش داد. مواد و روشها: دویست هزار سلول HEK293T در هر یک از خانههای ظروف 6 خانهای که حاوی یک لامل پوشیده از پلیاللیزین بود کاشته شده و تا رسیدن به تراکم 60 درصد در محیط مناسب رشد داده شدند. سلولها سپس توسط یک روش استاندارد فسفات کلسیم در حضور یا عدم حضور فسفات کلروکین با پلاسمید رمز کننده پروتئین GFP (Green Fluorescence Protein) ترانسفکت شدند. سلولها با میکروسکوپ فلورسانس مورد مشاهده قرار گرفته و میزان بیان GFP توسط نرم افزار Image J مورد اندازهگیری قرار گرفت. نتایج: ما نشان میدهیم که فسفات کلروکین میتواند بهمیزان قابل ملاحظهای ترانسفکشن سلولهای HEK293T را با واسطه فسفات کلسیم افزایش دهد بهطوریکه در حضور این ماده تعداد سلولهای ترانسفکت شده تا 8 برابر افزایش مییابد. فسفات کلروکین هیچ سمیتی برای سلولها نداشت ولی افزایش کارایی ترانسفکشن این ماده در حضور گلیسرول و یا DMSO (Dimethyl sulphoxide) مشاهده نگردید. نتیجه گیری: ما فسفات کلروکین را بهمنظور افزایش کارایی ترانسفکشن توسط روش فسفات کلسیم توصیه میکنیم. بهعلاوه پیشنهاد میشود فسفات کلروکین بهصورت تنها و در عدم حضور سایر محرکهای ترانسفکشن مورد استفاده قرار گیرد.
